微生物检查方法验证及其影响因素分析

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【摘要】 微生物检查是药品或食品安全性基本组成部分之一，而对微生物检查方法的验证是一项极其冗繁、复杂的工作，也是具有重要意义的工作之一。本文结合日常工作的实际，对微生物检查方法的验证过程以及影响因素进行分析总结，并提出相关的建议，以期能够对微生物检查提供一定的参考价值，提高药品或食品中的微生物检出率，保证人民的食品药品安全和品质。
【关键词】 微生物检查；方法验证；影响因素
所谓的药品是能够对人类疾病起到预防、诊断以及治疗功能的物质，其能够对人类的生理功能进行调节，以使人类恢复正常的生理机能，但是药品都具有一定的适应症和相关功能以及用料、用法。药品具有对人类各种疾病的治疗效能，是患者解除病痛和康复的重要保证，因此药品的安全性一直是社会关注的焦点，而作为药品检查中的重要项目微生物检查自然占有不可忽视的地位。微生物对药品造成的污染，主要是指微生物体以及微生物的代谢产物便可能会对患者的机体带来感染、过敏甚至中毒等病症，给患者生命带来威胁。微生物检查是保证药品质量的重要指标，现对微生物检查方法验证以及影响因素分析的内容概括如下：
1 微生物检查方法验证的难题
1.1 微生物的不稳定状态 微生物一种只有在适宜环境条件下才进行生长繁殖等生命活动，而当环境不适宜则会进行一定程度的休眠，因此，不同环境和时间下的检测极可能会显示不同的检查结果[1]。尤其对一些混于抑菌药品中的微生物，仅在一定程度上受到抑菌药品的抑制而未被杀死，当随药品进入人体后，条件若适宜就可重新生长繁殖，从未对患者造成一定的危害。而有些抑菌药物还会对待检测菌种的检查带来一定的影响，使实验条件下漏检的实例发生，最终进入患者体内，危害患者的生命健康。
1.2 微生物的不确定性 微生物对药品的污染是一种不确定事件，造成污染的程序多种多样，包括制药环境、设备、运输、包装等多个环节，无法预测药品的污染路径和来源，同时由于药品的数量基数大，而多采取抽样式检查，对于微生物污染这个随机变量而言增加了检测难度。
1.3 微生物的不均匀性 微生物作为一种具有簇团性的生物，其所形成的簇团的大小以及紧密程度都是具有较大差异和可遗传性的特征，从而使得对其检查的手段的有效性具有一定的差异性，进而导致不均匀性。
1.4 微生物检查复杂性 微生物检查的方法验证具有较长的时间周期，繁冗的检测程序，大量的干扰因素，使得其检查负责度大幅增加。
2 微生物检查方法验证的方法
2.1 各种菌种计数验证 计数验证是方法微生物检查方法验证的准确性考察的重要指标[2]。要求在验证时，按照各种菌种的标准制备方法以及供试品的制备过程，在检验试验中加入一定数量代表性的阳性菌，并统计检测过程的该菌回收率。这是一个需要对每一种菌种分别进行的定量性试验，一旦出现菌种回收率不符合要求，便预示方法具有一定的不恰当性，需在实验基础上进行改进，并重新验证，直到阳性菌回收率均符合要求。
2.2 控制菌检查方法验证 依据不同的控制菌检查项目确定相应验证菌，例如大肠菌检验的验证菌可选用大肠埃希菌，而对于梭菌的检查则可选用生孢梭菌作为验证菌。验证过程中为保证方法的特异性需设立阴性菌对照组，要求其检查中不得出现阴性对照菌。
3 微生物检查验证方法的影响因素及解决方案
3.1 药品本身的特性 很多药品本身具有一定抑菌以及杀菌作用，对于该类药品的微生物检查结果是否具有参考价值，决定于其检查条件下该药品是否发挥了抑菌作用[3]。因此检查过程中，必须采取一定的措施以排除药品自身的抑菌效果造成的结果准确性影响。具体的实施方案一般都是按照不同的稀释浓度进行微生物的检查，最终在最低稀释浓度下对微生物进行回收菌测定，在保证结果准确性的前提下，可适当的调整供试品的实验浓度。
3.2 标准菌的保存 微生物检查验证中包含多种菌种，其生存的环境复杂多样，因此为减少试验中的误差，实验中所用的菌种需要是能够具有典型性、稳定性，排除耐药性变异性、菌落变异性以及形态变异性等特征。同时，对于标准菌要根据正规的方法进行保存，且保证应用的菌株传代次数在5代以内。
3.3 培养基的选择 培养基是能够保证检测培养物正常生长的必要基质。因此，培养基的质量很大程度能够影响到菌种生长的状态。多项研究已经证明，避免电炉直火加热、禁止剩余培养基使用是保证培养基中糖类、氨基酸等营养物质不受破坏有效手段。同时，需要严格控制培养基的PH值、温度以及培养皿中培养基的厚度，保证菌落的生长。
3.4 人为因素影响 微生物检查验证过程是一个严格的实验过程，任何的疏忽和人为因素都会对结果造成重大的影响[4]。因此，验证过程中要求实验操作者具有熟练的操作技术，严谨的实验过程。同时，由于细菌本身具有生长密集，体积小的特点给计数工作带来一定的困难，可适当的选用不同倍数的显微镜进行观察计数，保证准确度。
4 小 结
综上所述，微生物验证过程是保证药品质量的重要过程，但由于其本身受到多种因素的影响，给准确度的保证上带来了阻碍。在整个方法验证过程中需要综合多方因素，严格操作过程，提高操作者的熟练程度，规范外部环境因素，以期获得准确的结果，减少误差。
参考文献
[1] 李佳宁.影响微生物限度检查方法验证结果的若干因素分析[J].药事组织，2007，16（9）：35-36.
[2] 向东.影响微生物限度检查及方法验证的因素分析[J].现代医药卫生，2007，23（5）：2329-2340.
[3] 陈健梅.微生物检查方法验证及其影响因素分析[J].药品检验，2008，5（12）：66-68.
[4] 曹晓云，郭艳娟.药品微生物限度检查方法学验证试验及其相关的技术问题[J].天津药学，2006，18（6）：49-51.